HPLC分析條件的篩選主要包括以下步驟:
1. 確定目標化合物性質。需要了解待分離雜質的一些性質,包括分子量、結構式(主要看有哪種基團)等,并預測該種物質在哪種有機溶劑中易容。根據結構式可以大致預測分子極性大小,同時也可以判斷該物質是否容易水解。
2. 根據目標化合物的性質,結合雜質在各種常見洗脫溶劑中的溶解性,例如在甲醇、乙腈、正己烷中哪個比較易溶,從而選擇適合用于洗脫的有機流動相,確定方法開發時是用正相色譜柱還是反向色譜柱。
3. 在總量為m樣品中加入質量為mS的內標物S,然后根據被測物和內標物的重量以及在色譜圖上相應的峰面積比求出某組分i的含量。這種方法不需所有組分都出峰,操作條件和進樣量基本無影響。
以上步驟完成后,可以進一步確定HPLC分析的實驗參數,包括流動相的組成及其比例、流速、檢測波長等。以上條件可根據文獻資料了解或經驗總結,若無相關經驗可參考,可進行實驗設計篩選實驗條件,通過實驗結果不斷優化分析條件。同時注意內標物難找,需要穩定無反應、結構性能相似、保留時間內插并完全分離。
希望以上HPLC分析條件篩選的步驟對你有所幫助。