使用C8和C18色譜柱時,需要避免高水相流動相,這主要是由于以下幾個方面的原因:
### 一、固定相的非極性特性
* C8和C18色譜柱的固定相表面鍵合有C8或C18烷基鏈,這些烷基鏈具有類似油脂的非極性特性。在反相色譜法中,分析物在流動相和固定相之間進行分配以實現分離。由于固定相的非極性,它們通常適用于分析非極性或弱極性分析物。
### 二、高水相流動相的影響
1. **潤濕性差**:
* 類似油脂的非極性特性使得C8或C18固定相在高比例水相中不能被有效潤濕。流動相中的水分子由于具有較高的表面張力,往往只通過固定相孔之間的空間,而無法充分潤濕孔內的固定相。
* 當流動相中有一定比例的有機溶劑(如乙腈或甲醇)時,這些溶劑對C8或C18固定相具有良好的潤濕性,有助于分析物在色譜柱上的保留和分離。
2. **固定相塌陷**:
* 如果使用高比例的水相作為流動相,C8或C18固定相可能會因為表面脫水而塌陷,這種現象稱為固定相塌陷、鏈折疊或固定相打結。固定相塌陷會導致保留時間減少和保留時間的不重復性,嚴重影響分離效果。
3. **色譜柱性能下降**:
* 高水相流動相還可能導致色譜柱上的樣品殘留增加,影響后續分析的準確性。此外,硅膠基質色譜柱的硅膠粒子在高水相環境中可能會發生溶解,導致色譜柱性能下降甚至損壞。
### 三、保留效果與分離效果
* 使用高比例水相流動相時,極性較強的化合物可能會與色譜柱之間的相互作用增強,導致拖尾現象增加,影響分離效果。
* 保留時間的減少和保留時間的不重復性也會使分析結果的可靠性降低。
### 四、替代方案與建議
* 如果需要使用水性或高比例水相的流動相,可以考慮選擇其他類型的色譜柱,如未封端色譜柱、短鏈烷基色譜柱、極性嵌入烷基相色譜柱或寬孔徑相色譜柱等。
* 在方法開發階段,應仔細選擇合適的色譜柱和流動相條件,以最大限度地提高化合物的分離效果和保護色譜柱免受損壞。
綜上所述,使用C8和C18色譜柱時避免高水相流動相是為了保護色譜柱的固定相不受損害,確保分析結果的準確性和可靠性。