HPLC基線漂移是指在高效液相色譜(HPLC)分析中,基線隨時(shí)間發(fā)生不穩(wěn)定變化的現(xiàn)象。這種現(xiàn)象可能掩蓋真實(shí)的樣品信號(hào),導(dǎo)致分析結(jié)果不準(zhǔn)確。以下是導(dǎo)致HPLC基線漂移的幾個(gè)主要因素:
1. **柱溫和流動(dòng)相溫度波動(dòng)**:
* 對(duì)于部分檢測(cè)器,尤其是示差折光檢測(cè)器或高靈敏度的紫外檢測(cè)器,柱溫和流動(dòng)相的溫度波動(dòng)可能導(dǎo)致基線有規(guī)律的上升和下降。
* 解決方法:控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,可以在進(jìn)入檢測(cè)器前使用熱交換器或在檢測(cè)器之前進(jìn)行溫度調(diào)節(jié)。
2. **流動(dòng)相不均勻、污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成**:
* 流動(dòng)相的不均勻性、污染、變質(zhì)或使用低品質(zhì)溶劑可能導(dǎo)致基線漂移。
* 解決方法:使用HPLC級(jí)的溶劑和高純度的鹽和添加劑,對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。定期檢查流動(dòng)相的組成,確保其品質(zhì)。
3. **流通池污染或有氣體**:
* 檢測(cè)器流通池的污染或存在氣體可能導(dǎo)致基線漂移。
* 解決方法:采用極性強(qiáng)的溶劑(如甲醇)對(duì)檢測(cè)池進(jìn)行沖洗。如有必要,可以使用1N濃度的稀硝酸進(jìn)行沖洗(注意避免使用鹽酸,且不要接PEEK接頭)。
4. **色譜柱平衡不充分**:
* 色譜柱平衡不充分,尤其是更換流動(dòng)相時(shí),可能導(dǎo)致基線漂移。
* 解決方法:采用中極性強(qiáng)度的溶液,在分析前對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗,沖洗的體積通常需要達(dá)到10\~20倍的色譜柱體積。
5. **樣品中的強(qiáng)保留物質(zhì)**:
* 樣品中存在強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)可能以饅頭峰樣被洗脫出,表現(xiàn)為基線的抬升。
* 解決方法:使用保護(hù)柱,并在必要時(shí)定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
6. **檢測(cè)器設(shè)置問(wèn)題**:
* 檢測(cè)器設(shè)置不當(dāng),如波長(zhǎng)未調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處,也可能導(dǎo)致基線漂移。
* 解決方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整檢測(cè)器的設(shè)置,確保波長(zhǎng)等參數(shù)正確。
7. **設(shè)備老化和操作技術(shù)水平**:
* 設(shè)備長(zhǎng)時(shí)間使用后可能出現(xiàn)老化現(xiàn)象,如柱子老化、傳感器性能下降等,這些都可能導(dǎo)致基線漂移。
* 操作技術(shù)水平不夠熟練或設(shè)備調(diào)整不當(dāng)也可能導(dǎo)致基線漂移。
* 解決方法:定期檢查和維護(hù)設(shè)備,確保設(shè)備處于良好狀態(tài)。同時(shí),提高操作技術(shù)水平,確保正確調(diào)整和使用設(shè)備。
綜上所述,導(dǎo)致HPLC基線漂移的因素多種多樣,需要綜合考慮并采取相應(yīng)的解決措施。在實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)密切關(guān)注基線變化,及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并采取措施進(jìn)行糾正,以確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。